高效液相色譜是目前應用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統由流動(dòng)相儲液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類(lèi)似于氣相色譜，但是針對其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩;進(jìn)樣系統要求進(jìn)樣便利切換嚴密;由于液體流動(dòng)相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長(cháng)度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中做相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)。
1、樣品準備：樣品準備對HPLC分析結果至關(guān)重要。確保樣品純凈，并根據所需分離目標選擇適當的提取、凈化和濃縮方法。
2、色譜柱選擇：根據需要分離的化合物特性選擇合適的色譜柱?？紤]分離機理、柱填料類(lèi)型、柱尺寸和固定相親水/疏水性等因素。
3、流動(dòng)相選擇：根據待分離物的極性選擇合適的流動(dòng)相組合。優(yōu)化溶劑體系，平衡分辨率和保留時(shí)間。
4、校準曲線(xiàn)：為了定量分析，建立準確的校準曲線(xiàn)并進(jìn)行適當的驗證。使用已知濃度的標準品制備一系列濃度點(diǎn)，并確定響應因子或檢測靈敏度。
5、進(jìn)樣方法：選擇適當的進(jìn)樣方法，如自動(dòng)進(jìn)樣器或手動(dòng)進(jìn)樣。確保進(jìn)樣量恒定且符合儀器要求。
6、溫度控制：一些分析可能需要在特定溫度下進(jìn)行。使用恒溫箱或列溫控制器確保色譜柱處于穩定的溫度條件下。
7、檢測器設置：根據目標化合物的特性選擇合適的檢測器。常見(jiàn)的檢測器包括紫外-可見(jiàn)光譜檢測器（UV-Vis）、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器等。
8、數據分析：正確解釋和分析HPLC數據是確保準確結果的關(guān)鍵。使用合適的軟件進(jìn)行峰識別、積分和定量計算。
9、儀器維護：定期進(jìn)行儀器維護和校準，包括清洗色譜柱、更換流動(dòng)相溶劑和檢查液壓系統等。
